熒光免疫組化

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免疫組化試劑盒
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免疫組化(SP法)操作步驟

1. 切片常規脫蠟至水。如需抗原修複,可在此步後進行

2.緩衝液洗 3min/2 次。

3. 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鍾。

4. 緩衝液洗 5min/2 次。

5. 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鍾以封閉非特異性的背景染色。

(注:孵育不要超過 10 分鍾,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)

6. 緩衝液洗 5min/2 次。

7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)

8. 緩衝液洗 5min/2 次。

9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子),在室溫下孵育 20 分鍾。

10 .緩衝液洗 5min/2 次。

11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鍾。

(注:HRP Polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露並儲存在不透明的小瓶中。)

12 .緩衝液洗 5min/2 次。

13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻後滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鍾。(具體時間由染色深淺決定。)

14 .自來水充分衝洗,複染,脫水,透明,封片。

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